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发酵罐机械方面有哪些使用操作？

安装好电极。在灭菌前检查各接口，各个管线外观是否是正常的，出蒸汽管是否是牢固的。各个阀门应由两个人去检查是否处于完全关闭状态。

灭菌时至少要求两个人在场，一个人来负责操作各种阀门，另一个人来负责观察报告各项参数。

确认各个阀门处于关闭状态后，打开蒸汽发生器进水阀，启动蒸气发生器，蒸气发生器开始自动进水，此时应该打开蒸气发生器下部的排水阀，尽量放去水锈后关闭排水阀。注意观察蒸汽发生器内水量液位，防止发生事故。

此时应完全打开夹套出气阀阀门，缓慢打开蒸汽发生器的总阀门，缓慢打开部分夹套进气阀，开始对夹套通入水蒸气。开始时可能蒸汽压力不稳，压力表指针剧烈摆动，可以适当关小夹套进气阀，然后依次来打开取样阀出蒸汽阀，取样阀进蒸汽阀，底阀出蒸汽阀，底阀进蒸汽阀，对取样阀和底阀灭菌，同时排尽压力不稳的水蒸气。水蒸气压力不剧烈变化时再依次关闭、底阀出气阀。

罐内的温度逐渐上升，至所设置90°温度时，搅拌电机停止转动，此时打开罐体总进气阀，打开罐体出气管阀，依次打开以下阀门：打开出气调节阀，缓慢打开罐体进蒸汽阀对罐内通入蒸汽，空气滤器表压开始上升，超过0.1MP时打开冷凝水阀门疏水，继续开大罐体进蒸汽阀，除尽罐内空气后，罐内压缓慢上升，调整出气调节阀，使之达到灭菌所要求温度压力，达到灭菌温度时计时开始。

调整夹套进气阀、罐体进蒸汽阀和出气调节阀，使温度、罐压保持所设温度。灭菌时间到后，依次关闭已开的各进汽阀门，关闭蒸汽总阀门，完全放开罐内尾气排气阀放掉罐内压力，关闭蒸汽发生器电源。打开空气压缩机，等罐压降至0.05MP时，缓慢打开进气调节阀，维持罐内正压。

灭菌过程中，操作员应穿长衣长裤，带防护手套，防止烫i伤。灭菌过程中如果蒸汽发生器自动进水，蒸汽总压将迅速下降，必要时可以适当开大蒸汽总阀门，保持压力，但要小心观察压力变化。对罐内通蒸汽时，灭菌后罐压下降较快，注意通无菌空气时机。尽量不要使空气压缩机和蒸汽发生器同时工作。灭菌过程中空气滤器压力不应超过0.2MP。冷凝水的大小将影响罐内液体灭菌后浓度，要考虑蒸汽冷凝水增加量。

去除视镜冲洗管道

为了便于观察发酵罐内的发酵情况，在大型发酵罐内一般都设置了冲洗视镜的蒸汽管道。但是，蒸汽一旦冷凝在管道中，就无法完全保证冷凝水的无菌，因此应该去除冲洗视镜的蒸汽管道，减少染菌隐患。如果因罐内雾气大看不清楚，可以采用更高亮度的视镜灯。

PVDF膜净化效果可靠

传统的空气净化系统使用活性炭、棉花、超细玻璃纤维纸作为过滤芯，其过滤效果差，且操作复杂。目前，国内的膜过滤技术已比较成熟，如用偏二氟乙烯（PVDF）制成的折叠微孔滤膜滤芯不仅过滤精度高，且流量大。使用时技术人员只要注意对过滤器前压缩空气进行除湿脱油，并按规范对过滤器进行灭菌，即可保证空气无菌。另外，由于PVDF膜对压缩空气中的水分不敏感，膜本身的疏水性强，因此可解决以往当空气湿度过大时棉花过滤器等不能使用的问题。新疆某发酵车间对10吨发酵罐采用PVDF过滤器的净化效果进行了考察。技术人员在过滤器后挂了一个测样瓶，测样瓶用灭菌后不接种的LB通用细i菌培养基，连续通入过滤后的压缩空气以监测过滤器效果（只要LB通用细i菌培养基保持清澈，就说明过滤器运行正常）。结果表明，该车间10吨发酵罐的过滤器在连续使用3个月后，测样瓶镜检表明LB细i菌培养基无菌，因此微孔滤膜（PVDF）的净化效果是可靠的。

定期检测监控系统

对发酵培养基进行彻底的灭菌处理是利用高温过饱和蒸汽使各种细i菌、真i菌蛋白质凝固而***。在医i药工业灭菌中，对预热时间、蒸汽阀门的开度、灭菌温度、灭菌压力和泡沫控制等都有严格要求，其中任何一个环节出现问题都很容易导致染菌。一般工业上灭菌温度在110℃，灭菌压力在0.5兆帕以上，而保证灭菌温度和压力的准确依赖于各种温度探头、压力传感器等监控系统。因此，定期对这类探头、传感器等进行检测十分重要。另外，随着发酵罐体积增大，相同罐压对应的罐温有所降低，因此当发现温度与压力的相关性发生变化时，应以温度为准。

发酵罐的设计原则：

　　发酵罐由若干零部件组合构成。对于可能与工艺物料接触的零部件，在设计时需要考虑可以清洗和对生物负荷的控制。发酵罐的洁净和无菌设计需要考虑系统的生物安全等级要求。发酵罐在进行生物反应器设计时，需遵从***卫生机构规定的生物安全等级要求，而遵从生物安全等级要求需基于微生物、工艺、产品以及使用者的选择。对于特定的生物安全等级要求，需在生物反应器的部件设计时考虑到某些特殊工况（如蒸汽保压）。如果发酵罐是用于培养具有生物危害性的有机物，则需采取措施，在CIP之前净化物料接触表面，或***及净化CIP用过的流体。发酵罐罐体应根据业主提供的设计参数确定压力、真空度以及温度等级。罐体需根据当地的法令、规程及标准进行设计制造、测试、检查和盖章验收。

发酵罐发酵过程的操作

1.接种：接种方法可采用火焰接种法或差压接种法。

火焰接种法：在接种口用酒精火圈消毒，然后打开接种口盖，迅速将接种液倒入罐内，在把盖拧紧。

差压法：在灭菌前放入垫片，接种时把接种口盖打开，先倒入一定量的酒精消毒。待片刻后把种液瓶的针头插入接种口的垫片。利用罐内压力和种液瓶内的压力差，将种液引入罐内，拧紧盖子。

2.罐压

发酵过程中须手动控制罐压，即用出口阀控制罐内压力。调节空气流量的，须同时调节出口阀，应保持罐内压力恒定大于0.03Mpa。

3.溶解氧（DO）的测量和控制

溶解氧的标定：在接种前，在恒定的发酵温度下，将转速及空气量开到***i大值时的溶解氧DO值作为100%。

发酵罐发酵过程的溶解氧DO测量和控制：DO的控制可采用调节空气流量和调节转速来达到。***简单是转速和溶氧的关联控制。其次则必须同时调节进气量（手动）控制。有时需要通入纯氧（如在某些***工程菌的高密度培养中）才能达到要求的DO值。

4.pH的测量与控制

pH值的校正：在灭菌前应对PH电极进行PH值的校正。

发酵罐在发酵过程中PH值的控制使用蠕动泵的加酸加碱来达到的，酸瓶或碱瓶须先在灭菌锅中灭菌。